HIGHLY SPECIFIC ESTRONE SULFATE ANTIBODY PRODUCTION USING HAPTEN-BOVINE SERUM ALBUMIN CONJUGATE AND MODIFIED TOLLEROGEN *

ELBANNA, I.M.⁽¹⁾, GAMAL, M.H.⁽¹⁾ and SALEM, A.⁽²⁾

(1)  Endocrinology Research Unit, Nuclear Research Centre, Atomic
Energy Authority, Cairo, Egypt and (2) Biochemistry Department,
Faculty of Sciences, Ain Shams University, Cairo, Egypt.

Key words: Estrone-3-sulfate, Radioimmunoassay, Immunization, Tollerogen, Conjucation chemistry.

طريقة مستحدثة لإنتاج مصل مضاد لمركب كبريتات الإسترون

ابراهيم محمد البنا و مجدى حسن جمال و أحمد سالم

خلاصـة

تم إجراء هذا البحث لتقييم طريقة جديدة لتخليق مركب كبريتات الاسترون محمل على البومين من مصل دم الابقار بهدف تقليل التكلفة وزيادة الإنتاج. استهدف البحث تأثير تثبيط المناعة لدى الأرانب لإنتاج أجسام مضادة للمركبات الاستروجينية المتداخلة بغرض تطبيق نظام التقدير المناعى الإشعاعى فى عينات السوائل البيولوجية مباشرة دون فصل كروماتوجرافى مسبق.

تم فى هذا البحث إنتاج المركب المحفز للمناعة كبريتات استرون-3-اوكسيم- البومين بقرى وكانت النتائج المتحصل عليها اعلى من نتائج البحوث السابقة، وكذلك تم انتاج استرون- 15- جلوبيولين الأرانب بغرض تنشيط إنتاج الأجسام المضادة للمركبات الاستروجينية المتداخلة فى التقدير المناعى الإشعاعى. استخدم فى هذه الدراسة خمسة من ذكور الأرانب النيوزيلاندى (مجموعة بها ثلاث أرانب والمجموعة الأخرى بها اثنين). بعد حقن المركب المثبط فى 3 أرانب، تم حقن المركب المحفز للمناعة فى المجموعتين وتم جمع عينات دم أسبوعية لتقييم العينات المفردة لتركيز الأجسام المضادة والخصوصية باستخدام كبريتات الاسترون المرقم بالتريتيوم المشع.

أوضحت النتائج أن الأجسام المضادة التى تم انتاجها باستخدام طريقة التثبيط أفضل من ناحية التخصص مقارنة بالطريقة المضادة فى حين كان تركيز الأجسام المضادة أقل من الطريقة المضادة، كما أن طريقة التثبيط كانت أفضل من ناحية الخصوصية فى حين يمكن زيادة التركيز بعد إجراء المزيد من التطعيمات المنشطة لمدة أطول من المستخدمة فى هذا البحث.

ABSTRACT

Estrone-3-sulfate represents an important estrogenic metabolite indicative to uterine function during early pregnancy and post-partum in animals. Exploiting preparation of less expensive estrone-3-sulfate bovine serum albumin (BSA) conjugate was persuaded for raising antiserum in rabbits. The use of estrone rabbit gamma globulin conjugate as a tollerogenic agent was used to investigate the effect on specificity of the harvested antiserum. Five male New Zealand rabbits were used. After immunization procedure, blood samples were collected and individual bleedings were evaluated for titre and specificity using estrone-3-sulfate-³H as a tracer. The tollerogenic pre-immunization procedure gave more specific antiserum than the conventional immunization method. Nevertheless, the titre was lower in tollerogenic than conventional method (1/3500 and 1/4900 as working final dilution, respectively). It is concluded that preparation of E₁ -3-sulfate oxime-BSA gave more suitable yield with less expense as compared with previous studies. Pre-immunization injection of tollerogen gave more specific antiserum while the lower titre could be improved after further booster immunization.